- 血小板抗体检测方法之——免疫沉淀法
- 版权:武汉天安医院 时间:2012-12-05 14:44 点击: 次
血小板抗体检测方法之免疫沉淀法 免疫沉淀法 包括直接法和间接法。 (1)直接法:用放射性核素或生物素标记患者血小板膜糖蛋白,清洗后将血小板裂解,将抗体-糖蛋白复合物用固相进行免疫沉淀(常用连接于玻璃珠上的葡萄球菌蛋白A),经SDS-PAGE分离蛋白,用放免免费健康热线:400-6325-120
血小板抗体检测方法之——免疫沉淀法
免疫沉淀法
包括直接法和间接法。
(1)直接法:用放射性核素或生物素标记患者血小板膜糖蛋白,清洗后将血小板裂解,将抗体-糖蛋白复合物用固相进行免疫沉淀(常用连接于玻璃珠上的葡萄球菌蛋白A),经SDS-PAGE分离蛋白,用放免法或酶促反应进行定性。
(2)间接法:将生物素化的或未经标记的血小板悬液,加人适当的单克隆抗体或待测血清或血浆,裂解血小板,离心取上清,与蛋白A琼脂糖凝胶匀浆混合,重新悬浮,离心取上清,用SDS-PAGE法分离蛋白质,转印于硝酸纤维素膜上,用ABC-AP系统或免疫染色(未标记的蛋白)进行处理,分析结果。
此方法在测定新的血小板自身和同种异体抗原方面有优势,并且不需要特异的单克隆抗体。但是试验方法较复杂,而且所要检测的血小板膜糖蛋白必须能被标记物标记,否则,易出现假阴性结果。
免疫沉淀法
包括直接法和间接法。
(1)直接法:用放射性核素或生物素标记患者血小板膜糖蛋白,清洗后将血小板裂解,将抗体-糖蛋白复合物用固相进行免疫沉淀(常用连接于玻璃珠上的葡萄球菌蛋白A),经SDS-PAGE分离蛋白,用放免法或酶促反应进行定性。
(2)间接法:将生物素化的或未经标记的血小板悬液,加人适当的单克隆抗体或待测血清或血浆,裂解血小板,离心取上清,与蛋白A琼脂糖凝胶匀浆混合,重新悬浮,离心取上清,用SDS-PAGE法分离蛋白质,转印于硝酸纤维素膜上,用ABC-AP系统或免疫染色(未标记的蛋白)进行处理,分析结果。
此方法在测定新的血小板自身和同种异体抗原方面有优势,并且不需要特异的单克隆抗体。但是试验方法较复杂,而且所要检测的血小板膜糖蛋白必须能被标记物标记,否则,易出现假阴性结果。
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